细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发,但是生物医学研究领域使用的细胞被错误鉴定和交叉污染的现象,一直是一个普遍存在的问题。 据统计,国外实验室有20%左右的细胞株被错误鉴定和交叉污染,NIH和ATCC近两年都对此发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定。
近年来,大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一,STR基因分型应用于细胞鉴定一已被ATCC等机构强烈推荐。
►【为什么要做细胞株鉴定?】
细胞株错误所造成的结果
- 细胞系的损失
- 时间和金钱的损失
- 在公众的领域(文献、专利等)提供错误的信息
- 造成实验结果不一致或不可重复
►【艾基生物细胞株鉴定的特点】
高度丰富信息
同时分析多个STR基因座,可以准确的判断细胞类型和交叉污染。
高通量和系统化平台
采用自动化分析系统可大量检测及数据分析,结果更加准确、客观。
►【技术路线】
►【送样要求】
基因组DNA:
OD 260/280 在1.8~2.0之间(OD260/230最好大于1.5),浓度≥30ng/μl,体积≥20μl,且无明显降解;
新鲜细胞:
- 细胞数≥10E6;
- 贴壁细胞经胰蛋白酶消化后,离心收集细胞沉淀;
- 悬浮细胞直接离心收集细胞沉淀;
- PBS清洗细胞沉淀,尽可能去除培养基与胰酶;
冻存细胞:
- 细胞数≥10E6;
- 冻存细胞从液氮罐中,37℃水浴复苏,融化后离心收集细胞沉淀;
- 尽可能去除冻存液,否则会影响DNA抽提质量;
►【样本寄送】
- 应在送样包裹中放置足量的冰袋或干冰,以减少在运输过程中因温度变化导致DNA降解的可能;
- 如无法使用冷冻寄送,请将细胞沉淀用真空抽干(无残留任何液体、不可加热);
- 为了保证DNA抽提质量,请确保细胞在消化或冻存前,细胞状态良好,处于生长对数期;
- 不建议以细胞悬液或细胞培养瓶形式寄送样本。
►【客户需知】
- 目前只针对人源细胞进行STR鉴定,非人源细胞暂不受理;
- 人源细胞分型结果会以20个基因座的STR分型结果来体现,与DSMZ收录的9个标准基因座信息进行比对,完全符合则属于同一细胞系;
- DSMZ数据库收录了来自ATCC, DSMZ, JCRB and RIKEN细胞库的2455种细胞系。未收录于以上细胞库的细胞系将无法匹配,需要用户自行上网比对;
- 如果细胞系为客户自行建立的新细胞系,请根据细胞基因分型结果自行与其他数据库比对;
- 我们不接受有致病性的样品。如果您的样品带有致病性,请您提供给我们基因组DNA,并将其进行加热处理以杀死致病原体。
►【位点信息】
D19S433 |
D5S818 |
D21S11 |
D18S51 |
D6S1043 |
D3S1358 |
D13S317 |
D7S820 |
D16S539 |
CSF1P0 |
AMEL |
vWA |
D8S1179 |
TP0X |
Penta E |
Th01 |
D12S391 |
D2S1338 |
FGA |
Penta D |
20个基因座检测,兼容9个基因座和16个基因座,信息量更加丰富,满足在更高准确性要求。
►【检测报告样式(部分)】
附:细胞收集步骤
收集贴壁细胞步骤:
- 移除细胞培养基,沿着培养皿壁缓慢加入PBS(无钙镁离子),勿将细胞冲离培养皿;
- 温和晃动培养皿,清洗细胞表面,然后移除PBS;
- 加入细胞消化液(如胰蛋白酶等),使消化液能覆盖所有细胞;
- 在37℃孵育2-3min,温和晃动培养皿知道细胞开始剥离培养皿;
- 加入培养基终止消化,温和重悬细胞; 500X g,离心 5 min,收集细胞;
- 移除上清液,用PBS清洗细胞沉淀两次;
- 最后500X g,离心5min,收集细胞沉淀。
收集悬浮细胞步骤:
- 将细胞悬液转移至离心管中, 500X g,离心5min,收集细胞;
- 移除上清液,用PBS清洗细胞沉淀两次;
- 最后500X g,离心5min,收集细胞沉淀。